病原微生物实验室了解(生物安全)及安全防护SICOLAB

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病原微生物实验室的了解（生物安全）及安全防护SICOLAB

病原微生物学是一门重要的以实验为基础的基础医学课程，和细胞生物学，免疫学，分子生物学等学科都有交汇，由于在工作过程中会接触到许多致病微生物，为了安全操作病原微生物，所以我们除了掌握必要的科研素质，基本操作技能的同时，特别需要学习实验室的生物安全。

1实验室的生物安全分级

世界卫生组织（WHO）早就认识到安全，特别是生物安全，是一个重要的国际性问题，因此早在1983年就出版了《实验室生物安全手册》（Laborato-ry Biosafety Manual）第1版。该手册倡导各国接受和执行生物安全的基本概念，并鼓励针对本国实验室如何安全处理致病微生物制订操作规范。自1983年以来，已经有很多国家利用该手册来指导本国的病原微生物实验室的生物安全。

世界卫生组织根据操作微生物的危险度等级、生物因子、生物安全水平等将实验室分四级：基础实验室———一级生物安全水平、基础实验室———二级生物安全水平、防护实验室———三级生物安全水平和最高防护实验室———四级生物安全水平。而我国生物安全分级则相反，一级最强，二级次之，四级最末。

一级生物安全水平实验室一般没有或存在极低的个体和群体危险，不太可能引起人或动物致病的微生物，供基础的教学、科研使用，房间必须具备基本的开放实验台，只能进行普通的实验，如细胞培养室（必须具有独自的房间，避免交叉污染）、分子生物学实验室等。

二级生物安全水平实验室个体危险中等，群体危险低，病原体能够对人或动物致病，但对实验室工作人员、社区、牲畜或环境不易导致严重危害。实验室必标明：生物危害安全标志、化学毒物危害标注、放射性危害标志。进入实验室必须做好个人防护，操作致病微生物必须有生物安全柜。

三级生物安全水平个体危险高，群体危险低，病原体通常能引起人或动物的严重疾病，但一般不会发生感染个体向其他个体的传播。要求实验室必须有严格的管理制度，实验室门口设置门禁，实验室系统必须保证负压环境，定向气流，出口淋浴以及污染物品的特殊处理。

四级生物安全水平是最高防护实验室，个体和群体的危险均高，病原体通常能引起人或动物的严重疾病，并且很容易发生个体之间的直接或间接传播，对感染一般没有有效的预防和治疗措施。在三级生物安全防护水平上增加气锁入口、进出口淋浴、污染物品的特殊处理。目前世界上只有少许国家拥有，而且都是涉密单位。

2在三级生物安全实验室对病原微生物进行安全有效的生物安全操作

2.1掌握各种操作规范进入实验室的技术人员必须熟练掌握实验技术安全标准化规范（standardoperating procedures，SOP）和微生物学操作技术（GMT）、熟知微生物已知和潜在的生物危害。实验室应对实验人员建立健康医疗档案并定期进行预防接种。实验人员应学习实验室准入制度、设施设备的监测维护制度、事故和职业性疾病报告制度、安全检查制度、危险标识制度等一系列实验室的规章制度，内容至少包括消防和预备状态、化学和反射安全、生物危险和传染预防、急救培训、刺伤后所执行的程序等内容，并进行书面和技能操作的考试、考核，对培训效果进行评估，合格后颁发合格证，持证上岗。还要掌握实验设施设备，如：离心机、灭菌器、安全柜、动物饲养柜IVC系统等的使用。

2.2做好风险评估在三级生物安全实验室进行任何一种实验，首先必须对实验微生物做好风险评估。例如：结核分枝杆菌，要掌握致病性和免疫性、疾病的诊断、防治策略、实验过程中造成危险性后果的预防措施等，然后得出评估报告。符合条件的实验人员才可进入实验室进行实验。

2.3在实验室工作时必须做好个人防护个人防护的品种很多，主要包括安全镜、护目镜、

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口罩、面罩、个人呼吸器、防毒面具、帽子、实验服、隔离衣、连体衣、手套、鞋套等。在所有易发生潜在眼睛损伤的实验中，实验人员应该佩戴护目镜，以免液体飞入眼睛。如果发生生物危害液体喷溅至实验人员眼睛时，应该（或在同事的帮助下）在就进的洗眼装置下用大量缓流清水冲洗眼睛至少30分钟，事后必须填写报告单报告主管领导。在进行可能直接或意外接触到的血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的、两层手套（选用腕长的手套，避免手腕暴露在空气中）、N95口罩、防护服和隔离衣。如果在操作过程中，外层手套被污染，应立即用消毒剂喷洒手套并脱下后放入在生物安全柜中的高压灭菌袋中，并立即戴上新手套继续实验。在进行高度危险性的操作，应采用呼吸防护装备进行防护（实验室常用3M正压呼吸器），呼吸器应于实验人员面部相吻合，佩戴好后进行几次深呼吸，确认正常后方可进入实验室。呼吸器由专人保管，并做好定期充电和除臭，放入实验室中指定地点。

2.4实验前的准备应规范实验前应做好实验准备，核实所要带入物品，进入实验室必须按照实验操作程序（SOP）严格进行。所有实验操作应在生物安全柜内经酒精消毒的实验台布上进行，实验台上不得摆放与实验无关的器械。实验过程中，如果碰到液体洒漏情形，必须用消毒巾铺盖污染部分，脱掉污染手套，处理好消毒区域再进行实验。实验完成后要清洁台面（可根据操作的微生物性质来选择合适的消毒剂）。在生物安全柜中操作微生物时，一定要了解生物安全柜的功能，实验过程中手不能随意进出安全柜。器械等实验用具应放在安全柜表面，不能阻挡进风口和出风口，以免干扰安全柜内部的定向气流。

2.5实验完成后的处理工作实验完成后必须做好污染废弃物处理和清场（可用75%的酒精浸泡的毛巾擦拭地面），并及时做好实验记录和消毒记录。实验室中受到污染的物品严格禁止带出实验室，必须经高压蒸汽灭菌后后方可带出。实验污染废弃物应分类，选择适合的灭菌程序进行（如高压蒸汽灭菌时根据废弃物种类选择固体模式、液体模式或动物模式等）灭菌处理，并填写废弃物处理登记，贴上高压指示条，定期送入焚化公司统一处理。不能搞压的物品必须消毒，然后放入标有生物安全的容器内带出。所有技术操作要尽量减少气溶胶和微小液滴的形成。

2.6出入三级安全实验室必须做好人员登记进行实验的过程中，监控室必须有人值班，全程监控，保持监控室和实验室内实验操作人员的语音畅通，进出监控室必须有门禁制度，禁止闲杂人等随便出入。尤其是在三级安全实验室中实验过程中如发生意外事故，必须做好应急措施或现场救治，保证应急出口通畅以备安全事故发生时可以迅速撤离实验室。